10X TBE Protokol atau Resep Penyangga Elektroforesis

TBE dan TAE digunakan sebagai buffer dalam biologi molekuler, terutama untuk elektroforesis asam nukleat. Buffer tris digunakan dalam kondisi pH yang agak basa, seperti untuk elektroforesis DNA, karena ini menjaga DNA larut dalam larutan dan dideprotonasi sehingga akan tertarik ke elektroda positif dan akan bermigrasi melalui a gel. EDTA adalah bahan dalam larutan karena ini umum agen chelating melindungi asam nukleat dari degradasi oleh enzim. EDTA mengkelat kation divalen yang merupakan kofaktor untuk nukleasi yang dapat mencemari sampel. Namun, karena kation magnesium adalah kofaktor untuk DNA polimerase dan enzim restriksi, konsentrasi EDTA dijaga agar tetap rendah (sekitar 1 mM konsentrasi).

Anda tidak perlu mensterilkan solusinya. Meskipun presipitasi dapat terjadi setelah rentang waktu tertentu, solusi stok masih dapat digunakan. Anda dapat menyesuaikan pH menggunakan pH meter dan penambahan tetes demi tetes secara terkonsentrasi asam klorida (HCl). Tidak apa-apa untuk menyimpan buffer TBE pada suhu kamar, meskipun Anda mungkin ingin menyaring larutan stok melalui filter 0,22-mikron untuk menghilangkan partikel yang akan mendorong curah hujan.

instagram viewer

Menggunakan solusi stok 5X atau 10X secara tidak sengaja akan memberi Anda hasil yang buruk karena panas akan dihasilkan. Selain memberi Anda resolusi buruk, sampel mungkin rusak.

Meskipun TBE dan TAE adalah buffer elektroforesis yang umum, ada pilihan lain untuk solusi konduktif molaritas rendah, termasuk buffer borat litium dan buffer natrium borat. Masalah dengan TBE dan TAE adalah bahwa buffer berbasis Tris membatasi medan listrik yang dapat digunakan dalam elektroforesis karena terlalu banyak muatan menyebabkan suhu yang tidak terkendali.