Agar spesies yang berbeda menyimpang dari nenek moyang yang sama dan berkendara evolusi, isolasi reproduksi harus terjadi. Ada beberapa jenis isolasi reproduksi yang mengarah pada spesiasi. Salah satu metode yang paling umum adalah isolasi prezygotic yang terjadi sebelum fertilisasi terjadi gamet dan mencegah berbagai spesies dari mereproduksi secara seksual. Pada dasarnya, jika individu tidak dapat bereproduksi, mereka dianggap berbeda jenis dan menyimpang di pohon kehidupan.
Ada beberapa jenis isolasi prezygotic yang berkisar dari ketidakcocokan gamet dengan perilaku yang menghasilkan ketidakcocokan, dan bahkan jenis isolasi yang secara fisik menghambat individu pembiakan.
Isolasi mekanis — ketidakcocokan organ seksual — mungkin merupakan cara paling sederhana untuk menghentikan individu agar tidak saling bereproduksi. Baik itu bentuk organ reproduksi, lokasi, atau perbedaan ukuran itu melarang individu untuk berpasangan, ketika organ seksual tidak cocok bersama, perkawinan tidak mungkin terjadi.
Pada tanaman, isolasi mekanis bekerja sedikit berbeda. Karena ukuran dan bentuknya tidak relevan dengan reproduksi tanaman, isolasi mekanis biasanya dihasilkan dari penggunaan penyerbuk yang berbeda untuk tanaman. Misalnya, pabrik yang dirancang untuk itu penyerbukan lebah tidak akan kompatibel dengan bunga yang diandalkan Kolibri untuk menyebarkan serbuk sari mereka. Meskipun ini masih merupakan hasil dari bentuk yang berbeda, itu bukan bentuk gamet yang sebenarnya yang penting, tetapi lebih tepatnya, ketidakcocokan bentuk bunga dan penyerbuk.
Spesies yang berbeda cenderung memiliki musim kawin yang berbeda. Waktu siklus kesuburan wanita dapat mengakibatkan isolasi temporal. Spesies serupa mungkin secara fisik kompatibel, namun mungkin masih belum bereproduksi karena musim kawin mereka terjadi pada waktu yang berbeda dalam setahun. Jika betina dari satu spesies subur selama bulan tertentu, tetapi jantan tidak dapat bereproduksi pada saat itu tahun, yang dapat menyebabkan isolasi reproduksi antara kedua spesies.
Terkadang, musim kawin dari spesies yang sangat mirip agak tumpang tindih. Ini terutama benar jika spesies tersebut hidup di daerah yang berbeda sehingga tidak ada peluang untuk hibridisasi. Namun, telah ditunjukkan bahwa spesies serupa yang hidup di wilayah yang sama umumnya tidak memiliki fase perkawinan yang tumpang tindih, bahkan jika mereka melakukannya ketika berada di lingkungan yang berbeda. Kemungkinan besar, ini adalah sifat adaptasi yang dirancang untuk mengurangi persaingan untuk sumber daya dan pasangan.
Jenis lain isolasi prezygotik antara spesies berkaitan dengan perilaku individu, dan, khususnya, perilaku di sekitar waktu kawin. Sekalipun dua populasi spesies yang berbeda kompatibel secara mekanis dan temporal, mereka perilaku ritual kawin yang sebenarnya bisa cukup untuk menjaga spesies dalam isolasi reproduksi dari satu lain.
Ritual perkawinan, bersama dengan perilaku kawin lain yang diperlukan - seperti perkawinan dan tarian kawin - sangat penting bagi jantan dan betina dari spesies yang sama untuk menunjukkan sudah saatnya bereproduksi. Jika ritual kawin ditolak atau tidak diakui, maka kawin tidak akan terjadi dan spesies akan secara reproduktif diisolasi satu sama lain.
Misalnya, booby kaki biru burung memiliki tarian kawin yang sangat rumit yang harus dilakukan jantan untuk merayu betina. Betina akan menerima atau menolak kemajuan jantan, namun, spesies burung lain yang tidak memiliki yang sama tarian kawin akan sepenuhnya diabaikan oleh perempuan — artinya mereka tidak memiliki kesempatan untuk bereproduksi dengan perempuan berkaki biru booby.
Bahkan spesies yang sangat dekat sekalipun memiliki preferensi mengenai di mana mereka tinggal dan di mana mereka bereproduksi. Kadang-kadang, lokasi yang disukai untuk acara reproduksi ini tidak kompatibel antara spesies, yang mengarah pada apa yang dikenal sebagai isolasi habitat. Jelas, jika individu dari dua spesies yang berbeda hidup di tempat yang tidak saling berdekatan, tidak akan ada kesempatan untuk berkembang biak. Jenis isolasi reproduksi ini mengarah pada spesiasi lebih lanjut.
Namun, bahkan spesies berbeda yang hidup di tempat yang sama mungkin tidak kompatibel karena tempat reproduksi yang mereka sukai. Ada beberapa burung yang lebih suka jenis pohon tertentu, atau bahkan bagian yang berbeda dari pohon yang sama, untuk bertelur dan membuat sarang mereka. Jika spesies burung serupa ada di daerah tersebut, mereka akan memilih lokasi yang berbeda dan tidak akan kawin campur. Ini membuat spesies terpisah dan tidak dapat bereproduksi satu sama lain.
Isolasi gametik memastikan bahwa hanya sperma dari spesies yang sama dapat menembus telur spesies itu dan tidak ada yang lain. Selama reproduksi seksual, sel telur wanita menyatu dengan sperma pria dan, bersama-sama, mereka menciptakan zigot. Jika sperma dan sel telur tidak kompatibel, pembuahan tidak dapat terjadi. Karena beberapa sinyal kimia yang dikeluarkan oleh telur, sperma bahkan mungkin tidak tertarik padanya. Faktor lain yang mencegah fusi adalah sperma yang tidak dapat menembus sel telur karena make-up kimianya sendiri. Salah satu dari alasan ini cukup untuk menggagalkan fusi dan mencegah pembentukan zigot.
Jenis isolasi reproduksi ini sangat penting untuk spesies yang bereproduksi secara eksternal di dalam air. Misalnya, betina dari sebagian besar spesies ikan melepaskan telurnya ke dalam air di tempat berkembang biak yang mereka sukai. Ikan jantan dari spesies itu kemudian datang dan melepaskan sperma mereka di atas telur untuk membuahi mereka. Namun, karena ini terjadi dalam lingkungan cair, beberapa sperma terhanyut oleh molekul air dan tersebar. Jika tidak ada mekanisme isolasi gametik pada tempatnya, sperma mana pun dapat melebur dengan telur apa pun, yang akan menghasilkan hibrida dari spesies apa pun yang kebetulan kawin di dalam air di sana pada saat itu.