RFLP dan Aplikasi Analisis DNA

Restriksi Fragmen Panjang Polimorfisme (RFLP) adalah metode analisis genetik molekuler yang memungkinkan individu untuk diidentifikasi berdasarkan pola unik dari enzim restriksi memotong wilayah DNA tertentu.

Juga disebut sebagai Analisis RFLP, teknik ini mengambil keuntungan dari polimorfisme dalam kode genetik individu individu. Meskipun semua anggota suatu spesies pada dasarnya memiliki susunan genetik yang sama, perbedaan-perbedaan kecil ini menjelaskan variasi fenotip, seperti penampilan atau metabolisme, antara individu.

Teknik analisis RFLP melibatkan pemotongan wilayah tertentu DNA dengan variabilitas yang diketahui, dengan enzim restriksi, kemudian memisahkan fragmen DNA dengan elektroforesis gel agarosa dan menentukan jumlah fragmen dan ukuran relatif.

Enzim restriksi adalah enzim, molekul protein, yang memotong DNA di lokasi restriksi. Intinya, sampel DNA dipecah dan dicerna oleh enzim restriksi. Fragmen yang dihasilkan dipisahkan sesuai dengan panjangnya, dan pola ukuran fragmen akan berbeda untuk setiap individu yang diuji.

Proses RFLP lengkap membutuhkan pelabelan probe, fragmentasi DNA, elektroforesis, blotting, hibridisasi, pencucian, dan autoradiografi. RFLP yang terdeteksi divisualisasikan menggunakan film sinar-X dalam autoradiografi, di mana fragmen DNA dapat dilihat dan dianalisis setelah dipisahkan satu sama lain dengan elektroforesis.

Beberapa aplikasi untuk analisis RFLP meliputi:

• Sidik jari DNA: Ilmuwan forensik dapat menggunakan analisis RFLP untuk mengidentifikasi tersangka berdasarkan sampel bukti yang dikumpulkan di tempat kejadian kejahatan.
• Ayah: RFLP juga digunakan dalam penentuan ayah atau untuk melacak keturunan.
• Keragaman Genetik: Teknik ini dapat digunakan dalam mempelajari evolusi dan migrasi satwa liar, mempelajari pola pemuliaan dalam populasi hewan dan deteksi dan diagnosis penyakit tertentu.

Teknik menggunakan deteksi variasi RFLP dalam genom adalah alat vital dalam pemetaan genom dan analisis penyakit genetik. Jika lokasi gen penyakit tertentu sedang dicari dalam kromosom tertentu, maka para peneliti akan melakukannya menganalisis DNA anggota keluarga dengan penyakit, kemudian mencari pola pewarisan yang serupa di RFLP alel.

Setelah gen penyakit terlokalisasi, melakukan analisis RFLP pada anggota keluarga lainnya dapat mengungkapkan pembawa gen mutan atau sinyal risiko penyakit secara keseluruhan. Penting untuk dicatat bahwa teknik RFLP tidak banyak digunakan sekarang karena teknik yang lebih baru dan lebih kuat digunakan untuk analisis DNA dalam ilmu forensik dan beberapa bidang lainnya.

Sayangnya, teknik analisis RFLP membosankan dan lambat. Selain membutuhkan sejumlah besar sampel DNA - sampel biasanya harus berukuran seperempat, yaitu relatif besar untuk sampel DNA - proses, dari pelabelan pemeriksaan hingga pencucian dan autoradiografi, dapat memakan waktu hingga satu bulan penuh hingga lengkap.

Hasil dari Proyek Genom Manusia telah cukup banyak menggantikan kebutuhan RFLP. Proyek ini memungkinkan untuk menentukan seluruh urutan DNA yang ditemukan dalam sel manusia, genom manusia, dan untuk mengidentifikasi semua gen dalam genom manusia.