Saline Phospate-Buffered atau PBS Solution

PBS atau buffered fosfat saline adalah solusi penyangga yang sangat berharga karena meniru konsentrasi ion, osmolaritas, dan pH cairan tubuh manusia. Dengan kata lain, itu isotonik untuk solusi manusia, jadi kecil kemungkinannya untuk menyebabkan kerusakan sel, toksisitas, atau presipitasi yang tidak diinginkan dalam penelitian biologi, medis, atau biokimia.

Ada beberapa resep untuk menyiapkan solusi PBS. Solusi penting mengandung air, natrium hidrogen fosfat, dan natrium klorida. Beberapa preparat mengandung kalium klorida dan kalium dihidrogen fosfat. EDTA juga dapat ditambahkan dalam persiapan seluler untuk mencegah penggumpalan.

Saline yang mengandung fosfat tidak ideal untuk digunakan dalam solusi itu mengandung kation divalen (Fe²⁺, Zn²⁺) karena curah hujan dapat terjadi. Namun, beberapa solusi PBS memang mengandung kalsium atau magnesium. Juga, perlu diingat fosfat dapat menghambat reaksi enzimatik. Berhati-hatilah dengan potensi kerugian ini saat bekerja dengan DNA. Sementara PBS sangat baik untuk ilmu fisiologis, waspadai fosfat dalam sampel buffer-PBS yang dapat mengendap jika sampel dicampur dengan etanol.

Komposisi kimia khas 1X PBS memiliki konsentrasi akhir 10 mM PO₄³⁻, 137 mM NaCl, dan 2,7 mM KCl. Inilah konsentrasi akhir reagen dalam larutan:

Tergantung pada tujuan Anda, Anda dapat menyiapkan 1X, 5X, atau 10X PBS. Banyak orang hanya membeli tablet buffer PBS, melarutkannya dalam air suling, dan menyesuaikan pH sesuai kebutuhan dengan asam klorida atau natrium hidroksida. Namun, mudah untuk membuat solusi dari awal. Berikut adalah resep untuk saline 1X dan 10X yang mengandung buffer fosfat:

1. Larutkan garam pereaksi dalam 800 ml air suling.
2. Sesuaikan pH ke level yang diinginkan dengan asam klorida. Biasanya ini adalah 7.4 atau 7.2. Gunakan pH meter untuk mengukur pH, bukan kertas pH atau teknik tidak tepat lainnya.
3. Tambahkan air suling untuk mencapai volume akhir 1 liter.

Sterilisasi tidak diperlukan untuk beberapa aplikasi, tetapi jika Anda mensterilkannya, keluarkan larutan ke dalam alikuot dan autoklaf selama 20 menit pada 15 psi (1,05 kg / cm²) atau gunakan sterilisasi filter.

Saline yang mengandung fosfat mungkin disimpan pada suhu kamar. Mungkin juga didinginkan, tetapi solusi 5X dan 10X mungkin mengendap saat didinginkan. Jika Anda harus mendinginkan larutan pekat, simpan dulu pada suhu kamar sampai Anda yakin garamnya benar-benar larut. Jika presipitasi terjadi, pemanasan suhu akan membawa mereka kembali ke solusi. Umur simpan solusi yang didinginkan adalah 1 bulan.

10X adalah larutan terkonsentrasi atau stok, yang dapat diencerkan untuk membuat solusi 1X atau normal. Larutan 5X harus diencerkan 5 kali untuk membuat pengenceran normal, sedangkan larutan 10X harus diencerkan 10 kali.

Untuk menyiapkan larutan kerja 1 liter 1X PBS dari larutan 10X PBS, tambahkan 100 ml larutan 10X ke 900 ml air. Ini hanya mengubah konsentrasi larutan, bukan jumlah gram atau molar reagen. PH harus tidak terpengaruh.

Larutan buffer lain yang populer adalah saline atau fosfat buffered Dulbecco atau DPBS. DPBS, seperti PBS, digunakan untuk penelitian biologi dan buffer dalam kisaran pH 7,2 hingga 7,6. Itu dapat disimpan pada suhu kamar. Larutan Dulbecco mengandung konsentrasi fosfat yang lebih rendah. Ini adalah 8,1 mM mM ion fosfat, sedangkan PBS reguler adalah 10 mM fosfat. Resep untuk 1x DPBS adalah:

Larutkan garam dalam 800 mL air. Sesuaikan pH ke 7,2 hingga 76 menggunakan asam klorida. Sesuaikan volume akhir menjadi 1000 mL dengan air. Autoclave pada 121 ° C selama 20 menit.

• Dulbecco, R.; et al. (1954). "Pembentukan plak dan isolasi garis murni dengan virus poliomielitis". J. Exp. Med. 99 (2): 167–182.
• "Phineate buffered saline (PBS." Cold Spring Harbor Protocols (2006). Cold Spring Harbor Laboratory Press.