Buffer TAE adalah solusi yang terdiri dari basa Tris, asam asetat dan EDTA (Tris-asetat-EDTA). Secara historis, ini adalah buffer yang paling umum digunakan untuk gel agarosa elektroforesis dalam analisis produk DNA yang dihasilkan dari PCR amplifikasi, DNA protokol pemurnian atau Kloning DNA percobaan.
Buffer ini memiliki kekuatan ionik rendah dan kapasitas buffering rendah. Paling cocok untuk elektroforesis potongan DNA besar (> 20 kilobase) dan perlu sering diganti atau disirkulasi ulang untuk jangka waktu gel yang lebih lama (> 4 jam). Dengan mengingat hal itu, Anda mungkin ingin mempertimbangkan untuk membuat beberapa kumpulan buffer.
Mengingat bahwa penyangga mudah dibuat dan langkah-langkahnya dapat dilakukan dengan cepat, membuat lebih dari satu batch pada satu waktu seharusnya tidak terlalu memakan waktu atau sulit. Dengan menggunakan petunjuk di bawah ini, hanya perlu 30 menit untuk membuat buffer TAE.
Apa yang Anda Butuhkan untuk Penyangga TAE
Karena membuat buffer TAE hanya membutuhkan sekumpulan instruksi yang cepat dan sederhana, jumlah bahan yang dibutuhkan tidak berlebihan. Anda hanya perlu garam disodium EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid), basa Tris, dan asam asetat glasial.
Membuat buffer juga membutuhkan pengukur pH dan standar kalibrasi, yang sesuai. Anda juga akan membutuhkan gelas atau labu 600 mililiter dan 1500 mililiter serta silinder yang telah lulus. Akhirnya, Anda akan membutuhkan air deionisasi, batang pengaduk, dan piring aduk.
Dalam instruksi berikut, berat formula (massa atom setiap elemen dikalikan dengan jumlah atom, kemudian massa masing-masing ditambahkan bersama-sama) disingkat FW.
Siapkan Solusi Stok EDTA
Solusi EDTA dipersiapkan sebelumnya. EDTA tidak akan sepenuhnya menjadi solusi sampai pH diatur sekitar 8,0. Untuk stok 500 mililiter larutan 0,5 M (molaritas, atau konsentrasi) EDTA, timbangkan 93,05 gram garam disodium EDTA (FW = 372,2). Larutkan dalam air deionisasi 400 mililiter dan sesuaikan pH dengan natrium hidroksida (NaOH). Isi ulang solusi hingga volume akhir 500 mililiter.
Buat Solusi Saham Anda
Buat larutan stok terkonsentrasi (50x) TAE dengan menimbang 242 gram basa Tris (FW = 121,14) dan melarutkannya dalam sekitar 750 mililiter air deionisasi. Dengan hati-hati tambahkan 57,1 mililiter asam glasial dan 100 mililiter 0,5 M EDTA (pH 8,0).
Setelah itu, sesuaikan solusi ke volume akhir 1 liter. Solusi stok ini dapat disimpan pada suhu kamar. PH buffer ini tidak disesuaikan dan seharusnya sekitar 8,5.
Siapkan Solusi Kerja Penyangga TAE
Solusi kerja buffer TAE 1x dibuat dengan hanya mengencerkan larutan stok 50x dalam air deionisasi. Konsentrasi zat terlarut akhir adalah 40 mM (milimolar) Tris-asetat dan 1 mM EDTA. Buffer sekarang siap digunakan dalam menjalankan gel agarosa.
Membungkus
Periksa inventaris sebelum Anda mulai untuk memastikan Anda memiliki semua materi di atas untuk buffer TAE. Petugas suplai Anda harus dapat memberi tahu Anda jika mereka memiliki semua barang yang Anda butuhkan. Anda tidak ingin berakhir kehilangan sesuatu di tengah-tengah prosedur.