Cara Membuat Solusi Penyangga Tris untuk Penggunaan Medis atau Lab

Solusi penyangga adalah cairan berbasis air yang mencakup asam lemah dan basa konjugatnya. Karena sifat kimianya, larutan buffer dapat menjaga pH (keasaman) pada tingkat yang hampir konstan bahkan ketika perubahan kimia sedang terjadi. Sistem penyangga terjadi di alam, tetapi mereka juga sangat berguna dalam kimia.

Dalam sistem organik, larutan buffer alami menjaga pH pada tingkat yang konsisten, memungkinkan terjadinya reaksi biokimia tanpa merusak organisme. Ketika ahli biologi mempelajari proses biologis, mereka harus mempertahankan pH konsisten yang sama; untuk melakukannya mereka menggunakan solusi buffer yang sudah disiapkan. Solusi penyangga pertama kali dijelaskan pada tahun 1966; banyak buffer yang sama digunakan saat ini.

Agar bermanfaat, buffer biologis harus memenuhi beberapa kriteria. Secara khusus, mereka harus larut dalam air tetapi tidak larut dalam pelarut organik. Mereka seharusnya tidak dapat melewati membran sel. Selain itu, mereka harus tidak beracun, lembam, dan stabil di seluruh percobaan yang digunakan.

Solusi penyangga terjadi secara alami dalam plasma darah, itulah sebabnya darah mempertahankan pH yang konsisten antara 7,35 dan 7,45. Solusi penyangga juga digunakan dalam:

• proses fermentasi
• kain sekarat
• analisis kimia
• kalibrasi meter pH
• Ekstraksi DNA

Tris adalah kependekan dari tris (hidroksimetil) aminometana, senyawa kimia yang sering digunakan dalam salin karena bersifat isotonik dan tidak beracun. Karena memiliki Tris memiliki pKa 8,1 dan tingkat pH antara 7 dan 9, larutan buffer Tris juga biasa digunakan dalam berbagai analisis dan prosedur kimia termasuk ekstraksi DNA. Penting untuk diketahui bahwa pH dalam larutan buffer tris berubah dengan suhu larutan.

Sangat mudah untuk menemukan solusi buffer tris yang tersedia secara komersial, tetapi dimungkinkan untuk membuatnya sendiri dengan peralatan yang sesuai.

Material:

Hitung jumlah setiap barang yang Anda butuhkan berdasarkan konsentrasi molar larutan yang Anda inginkan dan jumlah buffer yang Anda butuhkan.

• tris (hydroxymethyl) aminomethane
• air deionisasi suling
• HCl

Prosedur:

1. Mulailah dengan menentukan konsentrasi apa (molaritas) dan volume buffer Tris yang ingin Anda buat. Misalnya, larutan buffer Tris yang digunakan untuk salin bervariasi dari 10 hingga 100 mM. Setelah Anda memutuskan apa yang Anda buat, hitung jumlah mol Tris yang diperlukan dengan mengalikan konsentrasi molar buffer dengan volume buffer yang sedang dibuat. (mol Tris = mol / L x L)
2. Selanjutnya, tentukan berapa gram Tris ini dengan mengalikan jumlah mol dengan berat molekul Tris (121,14 g / mol). gram Tris = (mol) x (121,14 g / mol)
3. Larutkan Tris ke dalam air suling deionisasi, 1/3 hingga 1/2 dari volume akhir yang Anda inginkan.
4. Campur dalam HCl (mis., 1M HCl) hingga pengukur pH memberi Anda pH yang diinginkan untuk solusi buffer Tris Anda.
5. Encerkan buffer dengan air untuk mencapai volume akhir larutan yang diinginkan.

Setelah larutan disiapkan, dapat disimpan selama berbulan-bulan di lokasi yang steril pada suhu kamar. Umur simpan larutan penyangga Tris yang panjang dimungkinkan karena larutan itu tidak mengandung protein apa pun.