Saline fosfat buffered (PBS) adalah solusi penyangga yang biasa digunakan untuk pewarnaan imunohistokimia (IHC) dan sering digunakan dalam penelitian biologi. PBS adalah larutan garam berbasis air yang mengandung natrium hidrogen fosfat, natrium klorida dan, dalam beberapa kasus, kalium klorida dan kalium dihidrogen fosfat.
Pewarnaan Imunohistokimia
Imunohistokimia mengacu pada proses mendeteksi antigen seperti protein dalam sel a bagian jaringan dengan menggunakan prinsip antibodi yang mengikat khusus untuk antigen secara biologis tisu. Pewarnaan imunofluoresen adalah metode pewarnaan imunohistokimia pertama.
Antigen menjadi terlihat ketika terkonjugasi dengan antibodi menggunakan pewarna fluoresensi karena suatu reaksi mengikat antigen-antibodi. Proses ini terjadi ketika diaktifkan oleh cahaya yang menarik dari panjang gelombang tertentu di bawah mikroskop fluoresen.
Osmolaritas dan konsentrasi ion larutan cocok dengan yang ada di tubuh manusia — mereka adalah isotonik.
Resep untuk Penyangga PBS
Anda dapat menyiapkan PBS dengan beberapa cara. Ada beberapa formula. Beberapa dari mereka tidak mengandung kalium, sementara yang lain mengandung kalsium atau magnesium.
Resep ini relatif mudah. Ini untuk solusi stok 10X PBS (0,1M). Namun, Anda juga dapat membuat solusi stok 1X, atau mulai dengan resep 10X ini dan encerkan menjadi 1X. Seluruh proses memakan waktu sekitar 10 menit dan opsi untuk menambahkan Tween juga disediakan.
Yang Anda Butuhkan untuk Membuat Penyangga PBS
- Sodium phosphate monobasic (anhydrous)
- Sodium phosphate dibasic (anhydrous)
- Natrium klorida
- Skala dan timbang kapal
- Pengaduk magnet dan batang pengaduk
- Probe pH yang dikalibrasi dan solusi yang tepat untuk menyesuaikan pH
- Labu volumetrik 1L
- Tween 20 (opsional)
Cara Membuat Penyangga PBS
- Timbang 10,9 g natrium fosfat anhidrat dibasik (Na2HPO4), 3,2 g natrium fosfat anhidrat monobasa (NaH2PO4), dan 90 g natrium klorida (NaCl). Larutkan hanya di bawah 1L air suling.
- Sesuaikan pH ke 7,4 dan buat larutan hingga volume akhir 1L.
- Encerkan 10X sebelum digunakan dan sesuaikan pH jika perlu.
- Anda dapat membuat solusi PBS yang mengandung 0,5 persen Tween 20 dengan menambahkan 5mL Tween 20 ke solusi 1L.
Tips Membuat Penyangga PBS
Simpan buffer pada suhu kamar setelah Anda membuat solusi PBS.
Pereaksi non-anhidrat dapat diganti tetapi Anda harus menghitung ulang massa masing-masing yang sesuai untuk mengakomodasi molekul air yang ditambahkan.
Penggunaan Buffer PBS
Saline buffer fosfat memiliki banyak kegunaan karena isotonik dan tidak beracun untuk sebagian besar sel. Ini dapat digunakan untuk melarutkan zat dan sering digunakan untuk membilas wadah sel. PBS dapat digunakan sebagai pengencer dalam berbagai metode untuk mengeringkan biomolekul karena molekul air di dalamnya akan terstruktur di sekitar zat — protein, misalnya. Ini akan "dikeringkan" dan diimobilisasi ke permukaan yang solid.
PH tetap stabil dan konsisten untuk mencegah kerusakan sel.
Lapisan tipis air yang mengikat zat mencegah denaturasi atau perubahan konformasi lainnya. Buffer karbonat dapat digunakan untuk tujuan yang sama tetapi kurang efektif.
PBS juga dapat digunakan untuk mengambil spektrum referensi saat mengukur protein adsorpsi dalam ellipsometry.